ABO血型鉴定，即指ABH血型抗原的检测。红细胞含A抗原的叫A型，含B抗原的叫B型，含A和B抗原的叫AB型;不含A、B抗原，而含H抗原的称O型。
中文名称
ABO血型鉴定
外文名称
ABO blood group
定义
指ABH血型抗原的检测
分类
分为A型、B型、O型、AB型
用于
临床输血等
鉴定方法
玻片法等
ABO血型系统主要是根据人类红细胞表面所含凝集原(即血型抗原，有A、B、H三种)的不同而命名的。ABO血型鉴定，即指ABH血型抗原的检测。红细胞含A抗原的叫A型，含B抗原的叫B型，含A和B抗原的叫AB型；不含A、B抗原，而含H抗原的称O型。A型人血清中只含抗B抗体；B型血清中只含抗A抗体；AB型血清中抗A和抗B抗体都没有；而O型血清中抗A和抗B抗体都有。采用标准的抗A及抗B血清以鉴定被检者红细胞上的抗原(直接试验)；同时用标准的A型及B型红细胞鉴定被检者血清中的抗体(反转试验)。只有被检者红细胞上的抗原鉴别和血清中的抗体鉴别所得出的结果完全符合时才能肯定具血型类别。
ABO血型分为A型、B型、O型、AB型。
检查介绍
ABO血型鉴定即指ABO血型抗原的检测。
ABO血型鉴定主要用于：临床输血：当循环血量不足或大失血或贫血需进行输血治疗，在输血前必须先选择血型相同的供血者，再进行交叉配血，完全相同后才能输血。在皮肤、肾移植等器官移植的时候选择ABO血型相符的供体。不孕症和新生儿溶血症病因的分析。亲子鉴定等。
凝集法
根据红细胞膜表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分为A，B，AB，O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。所谓的正定型是指用标准抗A抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原；所谓的反定型，是指用标准的A型、B型细胞来测定血清中有无抗A和（或）抗B。
抗A，抗B的标准血清。
玻片法正定型
1、 取清洁玻片1张，用蜡笔划成方法，标明抗A，抗B，分别滴加抗A，抗B血清在相应的方格内，再加受检者红细胞1滴，混匀。
2、 将玻片轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约1-5MIN，肉眼观察有无凝集反映，也可以用低倍镜观察结果。
英文：ABO blood group system
根据红细胞表面有无特异性抗原（凝集原）A和B来划分的血液类型系统。ABO血型系统是1900年奥地利兰茨泰纳发现和确定的人类第一个血型系统。根据凝集原A、B的分布把血液分为A、B、AB、0四型。红细胞上只有凝集原A的为A型血，其血清中有抗B凝集素；红细胞上只有凝集原B的为B型血，其血清中有抗A的凝集素；红细胞上A、B两种凝集原都有的为AB型血，其血清中无抗A、抗B凝集素；红细胞上A、B两种凝集原皆无者为O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的红细胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的红细胞发生凝集。输血时若血型不合会使输入的红细胞发生凝集，引起血管阻塞和血管内大量溶血，造成严重后果。所以在输血前必须作血型鉴定。正常情况下只有ABO血型相同者可以相互输血。在缺乏同型血源的紧急情况下，因O型红细胞无凝集原，不会被凝集，可输给任何其他血型的人。AB型的人，血清中无凝集素，可接受任何型的红细胞。但是异型输血输入量大时，输入血中的凝集素未能被高度稀释，有可能使受血者的红细胞凝集。所以大量输血时仍应采用同型血。临床上在输血前除鉴定ABO血型外，还根据凝集反应原理，将供血者和受血者的血液作交叉配血实验，在体外确证两者血液相混不发生凝集，方可进行输血以确保安全。
近年来发现存在于红细胞上的凝集原（即血型抗原）也存在于其他血细胞和一般组织细胞。所有细胞表面血型抗原的特异性可作为机体免疫系统鉴别自身和异物的标志。因此，在临床实践中血型鉴定也是组织器官移植成败的关键。人类血型有遗传特性，决定血型的血型抗原即凝集原ABOA和B及其前身物H，分别受ABO三个等位基因控制。A、B基因为显性基因，O（H）基因为隐性基因。它们的遗传规律所显示的父、母血型与子代血型间的关系，在法医学上可作为否定亲子关系的依据，若再配合其他血型系统的测定，则可判断亲子关系。
应用：
血型不仅在输血上有重要意义，而且在人种学、遗传学、法医学、移植免疫、疾病抵抗力（或易感性）等方面都有应用价值，在输血前，一定要检查病人(受血者)和输血人（供血者）的血型，并且要进行交叉配血试验。在临床医学中，除输血、移植免疫外，对新生儿溶血病、自身免疫性溶血性贫血特异性抗体的检查，也都需要血型知识和有关技术。
ABO血型抗原具有种族差异。例如，中欧地区的人群中，约40％以上的人为A型，近40％的人为O型，10％的人为B型，6％的人为AB型；而90％的美洲土著人为O型
通常只用两种抗血清即抗A及抗B血清，就可将群体分为四种血型。
根据血型的遗传规律，和临床工作方例起见，配偶间所生子女的血型如下：
各种ABO配偶所生子女的血型:
婚配式子女可能有的血型子女不可能有的血型
A×AA、OB、AB
A×BA、B、O、AB无
A×ABA、B、ABO
A×OA、OB、AB
B×BB、OA、AB
B×ABA、B、ABO
B×OB、OA、AB
AB×ABA、B、ABO
AB×OA、BAB、O
O×OOA、B、AB
婚配式A型血的可能B型血的可能O型血的可能AB型血的可能
A*A 75% 0%25%0%
A*B 25%25%25% 25%
A*O 50% 0%50%0%
A*AB50%25% 0% 25%
B*B0%75%25% 0%
B*O0%75%25% 0%
B*AB25%50% 0% 25%
O*O0% 0% 100%0%
O*AB50%50% 0%0%
AB*AB 25%25% 0% 50%
鉴定并分析3例疑难ABO血型红细胞抗原及血清抗体的特异性。方法：运用PCRSSP方法对3例患者ABO血型抗原进行基因分型；运用血型血清学技术对造成ABO血型正反定型不符的原因进行分析。结果：3例患者ABO血型基因分型分别为A/O、O/O、O/O。结合血型血清学技术为患者提供了安全的血液制品。结论：ABO血型基因分型技术弥补了血型血清学方法的一些不足，运用血型基因分型技术可以解决血清学方法难以鉴定的血型抗原。
1.1病例资料患者1， 男性，73岁，汉族， 有多次输血史，此次入院实验室检查血红蛋白（HB) 51 g/L，红细胞压积（HCT) 0.158 L/L,申请输血治疗。患者2，女性，42岁，汉族，曾生育１胎，无输血史，入院时神志不清，血红蛋白（HB) 39 g/L，血清总胆红素（TB) 39.0 μmol/L，直接胆红素（DB) 11.6 μmol/L，间接胆红素（IB) 27.4 μmol/L，申请输血治疗。患者3，男性， 8个月， 汉族，先天性心脏病手术备血。3例患者都因交叉配血时ABO血型正反定型不符，送本中心检查。
1.2基因分型试剂基因组DNA提取试剂盒、ABO血型基因分型试剂盒(B9801)均由美国G&T公司生产，TaqDNA聚合酶、MaKrer由大连宝生物工程公司提供;iCycler型扩增仪由美国BIORAD公司生产。
1.3血型血清学试剂单克隆抗A、抗B（20060202）标准血清购自长春博德生物制品公司。谱细胞（20060515）、抗人球蛋白抗IgG+C3d(20051216)均购自上海血液生物医药有限责任公司。单克隆IgM+IgG抗D(NDMG03801)血清购自DBL公司。ABO试剂红细胞为本室自制。
1.4基因分型方法患者外周血中基因组DNA 提取按美国G＆T公司试剂说明书进行操作。ABO血型的PCRSSP方法：17 μl反应体系，包括反应混合液（表1）（引物、dNTPs、PCR缓冲液等）7 μl，基因组DNA 1 μl（0.05～0.1 μg/μl），含有0.5 U TaqDNA酶液1 μl，此外，用8 μl石蜡油覆盖。扩增参数：95℃预变性 5 min；然后95℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 90 s，共 30个循环；最后72℃延伸5 min。扩增产物经4%琼脂糖凝胶（含0.5 μg/ml溴化已锭）电泳，在凝胶成像系统拍照记录结果，扩增产物长度与预期一致者判为阳性。
表1ABO血型基因分型（略）
1.5血型血清学试验方法ABO血型正反定型试验、抗球蛋白试验、吸收放散试验、血清中不规则抗体筛选、抗体效价测定、家系调查等试验参照文献进行。
2.1ABO血型基因PCRSSP方法分型结果患者1 ABO血型基因型A/O， 患者2 ABO血型基因型O/O； 患者3 ABO血型基因型O/O， 见图1。
图1ABO血型基因（PCRSSP方法）分型电泳图（略）
M:20 bp DNA Ladder MarKer；内对照:207 bp；阳性带A: 75 bp；阳性带O: 127 bp。患者1:A/O；患者2:O/O；患者3:O/O
2.2血型血清学鉴定结果
2.2.1ABO血型正反定型结果3例患者ABO血型正定型试验与反定型试验结果不一致 。患者1血清与O型红细胞凝集，怀疑患者血清中存在ABO以外IgM性质抗体。患者2血清与自身红细胞和O型红细胞均凝集，表明患者血清中存在不规则抗体，是自身抗体或冷抗体或红细胞体内致敏。患者3正定型为O型，反定型为A型,见表2。
2.2.2不规则抗体特异性鉴定采用上海血液生物医药有限责任公司的谱细胞与患者1血清在盐水介质中反应，反应格局中抗体呈现IgM抗E特异性。进一步分析抗E抗体的性质；将患者血清与2巯基乙醇（2Me）等量混合37℃水浴2 h后与谱细胞做抗球蛋白试验，反应结果同盐水介质结果，根据以上反应格局判断：患者1血清中存在抗E抗体，同时具IgM、IgG两种性质,见表3。
表23例患者室温ABO血型正反定型结果（略）
表3患者1血清、2Me处理后血清与谱细胞反应结果（略）
2.2.3吸收放散实验患者1血清与ODccEE型红细胞在4℃吸收1 h,经氯仿放散，结果显示患者血清中抗体为IgM+IgG抗E。患者2血清与3人份混合O型红细胞在4℃过夜吸收，经56℃热放散。结果显示患者血清中存在冷抗体，37℃时抗体无活性。放散液中不存在IgG性质抗体,见表4。
2.2.4抗球蛋白试验患者2红细胞直接抗球蛋白试验阳性（+++～++++）。根据病史及血清学分析，怀疑由药物引起，因样本量有限未做药物实验。
2.2.5抗体效价测定患者1血清中IgM+IgG抗E效价为128，IgM抗E效价为32，IgG抗E效价为64。患者2血清中冷抗体效价4℃为128，抗体在37℃无活性。
2.2.6家系调查患者3父亲血型A型，患儿母亲血型O型。基因分型患儿父母血型分别为A/O、O/O。
2.2.7输血结果患者1选择ADCcee型洗涤红细胞多次输注，均无输血不良反应。患者2选择O型洗涤红细胞，血型血清学实验严格控制在37℃室温环境下进行，多种介质配血相合发往临床，输血后无不良反应。患儿3手术中输注O型红细胞，无任何输血反应。
ABO血型系统的血清学特点是红细胞上缺乏相应抗原，而血清/血浆中存在对应抗体的特殊血型系统。不符合ABO血型系统规则的血型抗体（也就是抗A、抗B以外的血型抗体），一般称为不规则抗体。在临床上患者血清中不规则抗体是引起血型鉴定困难、疑难配型、新生儿溶血病、输血不良反应的主要原因。本资料中患者1血清中抗E抗体具IgM抗体性质，因此在盐水介质中呈现凝集反应，造成ABO血型正反定型不符；患者2血清中存在冷抗体，抗体在室温具有活性，而且红细胞直接抗球蛋白试验阳性，干扰了正常ABO血型正反定型；患者3是由于血清中缺乏IgM抗A，影响ABO血型的判断。在临床上婴幼儿ABO血型正反定型不符比较常见，多因抗体尚未产生或产生量太少，不足以引起肉眼可见的凝集反应所致［5］。此次3例疑难ABO血型的鉴定，我们应用了PCRSSP基因分型技术，快速明确了患者ABO血型基因型，通过抗体筛选和交叉配血技术，为患者提供安全有效的血液成分。PCRSSP基因分型技术是目前血型基因检测常用方法，是根据被检测血型基因序列突变位点的不同，分别设计一系列特异性寡合核苷酸引物，直接扩增目的基因片断［6］，经琼脂糖凝胶电泳分辨，再比较各引物对之间不同的反应格局来确定被检测血型基因型。它具有分型方法简便（整个操作程序只需两步，即PCR扩增与凝胶电泳）、样本检测量要求少（0.2 ml血样即可完成分型）等的特点。因此血型基因分型技术作为血型血清学方法的有益补充，对保证临床输血的及时性、有效性和安全性都具有重要意义。通过对部分临床疑难样本的分析我们体会到，血型基因分型技术对有长期多次输血史、直抗阳性患者红细胞不适合做凝集试验的基因分型可快速明确血型，同时还具有对临床疑难血型的鉴定不受抗原活性竟争、不规则抗体干扰及微生物污染等因素的影响，判型准确。
一般注意事项：①所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。②加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。③虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。④幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。⑤玻片法反应时间不能少于10min，否则凝集不能出现，造成假阴性。⑥正、反定型结果一致才可发报告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。
